《土壤微生物生态工程》— 菌种的保藏（24）

微生物菌种是实验室乃至国家十分宝贵的生物资源，是微生物研究的最基础工作，是保证研究和生产工作顺利开展的重要因素。应达到菌种不死、不衰、不乱，以便供研究与生产使用。

菌种保藏的方法很多，原理也大同小异。首先要挑选典型菌种的优良纯种，最好采用它们的休眠体（如分生孢子、芽孢等）；其次，创造一个最有利休眠的环境条件，如干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养以及添加保护剂等。一种良好的保藏方法，首先应能保持原种的优良性状不变，同时还须考虑方法的通用性和简便性。菌种保藏常用方法有如下一些。

（1）斜面菌种低温保藏法  利用低温对微生物生命活动有抑制作用的原理进行保藏。把斜面菌种、固体穿刺培养物或菌悬液等，直接放入4～5℃冰箱中。保藏时间一般不超过3个月，到时必须进行移接传代，再放回冰箱。

（2）砂土管保藏法  将干燥砂粒与细土混合后灭菌制成砂土管，然后接种保藏。若把砂土管放在低温或抽气后密封，效果更佳。此法适用于产孢子及芽孢菌种的保藏。保藏期1～10年。

（3）石蜡油封藏法  向培养好的菌种斜面上，加入灭菌石蜡油，高出斜面1cm，然后蜡封管口，放人冰箱。该法既可防止培养基水分蒸发，又能使菌种与空气隔绝。保藏期1～2年。

（4）真空冷冻干燥法  是目前较理想的一种方法。在低于-15℃下，快速将细胞冻结，并保持细胞完整，然后在真空中使水分升华致干。在此环境中，微生物的生长和代谢都暂时停止，不易发生变异，故可长时间保存，一般为5～10年，最多可达15年之久。此法兼备了低温、干燥及缺氧几方面条件，使微生物可以保存较长时间，但手续较麻烦，需要一定的设备。

我国由于1979年7月成立了中国微生物菌种保藏管理委员会(CCCCM)，它的任务是促进我国微生物菌种保藏的合作、协调与发展，以便更好地利用微生物资源为我国经济建设、科学研究和教学服务。该委员会下设6个菌种保藏管理中心，其负责单位、代号及保藏菌种的性质如下。

（1）普通微生物菌种保藏管理中心( CCGMC)  中科院微生物所，北京(AS)，真菌、细菌；中科院武汉病毒研究所，武汉( AS-IV)，病毒。

（2）农业微生物菌神保藏管理中心( ACCC)  中国农业科学院土壤肥料研究所，北京(ISF)。

（3）工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)  轻工业部食品发酵工业科学研究所，南京(ID)，真菌；卫生部药品生物制品检定所，北京(NICPBP)，细菌；中国医学科学院病毒研究所，北京(IV)，病毒。

（4）抗菌素菌种保藏管理中心(CACC)  中国医学科学院抗菌素研究所，北京(IA)；四川抗菌素工业研究所，成都(SIA)，新抗菌素菌种；华北制药厂抗菌素研究所，石家庄(IANP)，生产用抗菌素菌种。

（5）兽医微生物菌种保藏管理中心(CVCC)农业部兽医药品监察所，北京(CIVBP)。

根据世界菌种保藏联合会调查，55个国家的菌种保藏机构共352个，许多大学及研究所都有自己的保藏机构。目前世界上主要的菌种保藏机构有：美国的“美国典型菌种收藏所”(ATCC)，保藏方式主要采用冷冻干燥和液氮超低温冻结法；美国“农业研究服务部菌种收藏所”(ARS)设立在“北方地区研究室”(NRRL)；荷兰“真菌中心收藏所”(CBS)；日本“大阪发酵研究所”(IFO)；法国“里昂巴斯德研究所”(IPL)；德国“柯赫研究所”(RKI)。