《土壤和环境微生物学》——土壤酶检测应注意之点

土壤酶检测的具体方法这里不作介绍，只概括地提出检测时需注意之点。

要想准确测定土壤中积累的酶必须在测定期内，排除微生物新产生酶和对反应产物的同化，要达到此目的，又不影响土壤积累酶的活性，一般对土壤进行高能射线消毒或杀菌剂处理。最常用的杀菌剂是甲苯，但甲苯有它的不足之处，如某些真菌和细菌能利用甲苯作碳源；此外，甲苯不能完全消毒土壤，在某些处理中，也不能完全排除脱氢酶和呼吸酶活性，因而可保留产能和酶合成的潜力；甲苯还可能影响积累酶的活性。土壤用低剂量射线处理也是一种较好的方法，但它也有和甲苯类似的缺点，要减少这些处理所造成的影响，希望使用足够敏感的检测方法，将检测时间降低至几小时以下，几小时内反应保持恒定。

在检测酶时，土壤反应混合物中的底物应保持足够高的浓度。这可能要求底物的始浓度为反应Km值的100倍。除提高底物浓度外，其他检测条件，如温度、湿度也可以不同于自然情况，与反应有关的条件均控制在能表现最大可能的反应效率，但检测温度要低于最适温度，因在这些情况下较高温度明显增加非酶活性。一切物理，化学的反应均予以排除，所以在进行酶活测定时，常设无底物对照及无土壤的对照，从实验样品数据中减去对照样品的数量，以求获得较准确的结果。